【使用方法】

石蠟切片熒光tunel實驗步驟

石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇 Ⅰ5min-無水 乙醇Ⅱ5min，取出置于通風(fēng)廚內(nèi)等酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。(冬天應(yīng)提高脫蠟 溫度或適當(dāng)延長脫蠟時間)

通透：pH6.0 檸檬酸修復(fù)液中火修復(fù)8min ，室溫冷卻，用免疫組化筆劃圈，之后純水洗三 次(重要)。  (通透方式有多鐘：1 蛋白酶消化，2tritonx100 通透劑通透，檸檬酸修復(fù))

配試劑工作液以及孵育：熒光反應(yīng)液和 TdT 酶按 50:1 比例混合，此液為 tunel 工作液，， 將 tunel 工作液加入到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫箱孵育 1 到 2 小時，濕盒 內(nèi)加少量水保持濕度。

DAPI 復(fù)染細胞核：切片用 PBS (PH7.4) 洗滌 3 次，每次 5min。去除 PBS 后在圈內(nèi)滴加 DAPI 染液，避光室溫孵育 10min。

封片：玻片置于 PBS (PH7.4) 中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次5min。切片稍甩干后用 抗熒光淬滅封片劑封片。

鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

石蠟切片熒光tunel結(jié)果判讀

DAPI 染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，試劑盒為 AF555 標(biāo)記，陽性凋亡細胞核為紅 色。

【注意事項】

1. 本試劑僅供科研。

2. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。